Tick-borne pathogens infecting dogs from a highland swamp area / [Infecção em cães por patógenos transmitidos por carrapatos em uma área de brejo de altitude]

Objetivou-se neste estudo relatar a frequência e a identidade de patógenos transmitidos por carrapatos em cães residentes de uma área caracterizada por brejo de alta altitude. Amostras sanguíneas (n=203) foram coletadas e molecularmente analisadas via PCR (Babesia spp., Hepatozoon spp., Anaplasma spp. e Ehrlichia spp.) e sequenciamento de DNA. De todas as amostras analisadas, 8,87% (18/203) foram positivas a algum patógeno transmitido por carrapato. Especificamente, 5,42% (11/203) e 3,45% (7/203) foram positivos a Anaplasma platys e Ehrlichia canis, respectivamente. Este estudo fornece, pela primeira vez, evidência científica de infecção de cães por esses patógenos nessa área de alta altitude e reforça o provável papel de R. sanguineus s.l. como vetor de A. platys, principalmente considerando.se que muitos animais positivos eram infestados por essa espécie de carrapato.(AU)

Anaplasma marginale and A. platys Characterized from Dairy and Indigenous Cattle and Dogs in Northern Vietnam

Anaplasma marginale and A. platys were detected and characterized (16S rDNA sequence analysis) from dairy and indigenous cattle, and the latter in domestic dogs in Vietnam. A phylogenetic tree was inferred from 26 representative strains/species of Anaplasma spp. including 10 new sequences from Vietnam. Seven of our Vietnamese sequences fell into the clade of A. marginale and 3 into A. platys, with strong nodal support of 99 and 90%, respectively. Low genetic distances (0.2–0.4%) within each species supported the identification. Anaplasma platys is able to infect humans. Our discovery of this species in cattle and domestic dogs raises considerable concern about zoonotic transmission in Vietnam. Further systematic investigations are needed to gain data for Anaplasma spp. and members of Anaplasmataceae in animal hosts, vectors and humans across Vietnam.

Investigação molecular de Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum e Rickettsia spp. em felídeos selvagens cativos / Molecular investigation of Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum and Rickettsia spp. in captive wild felids

Doenças transmitidas por vetores estão emergindo e reemergindo em todo o mundo, representando um desafio na medicina humana e veterinária. Entre essas doenças estão aquelas causadas pelos agentes da ordem das Rickettsiales, que são bactérias Gram-negativas intracelulares obrigatórias, com capacidade de infectar vários animais e seres humanos. As Rickettsiales das espécies Ehrlichia spp. e Anaplasma spp. são observadas em vacúolos citoplasmáticos de leucócitos e plaquetas. As Rickettsiales da espécie Rickettsia spp. infectam livremente citoplasma ou núcleo de células hospedeiras. O objetivo do presente estudo foi investigar a infecção natural por Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum e Rickettsia spp. em felídeos selvagens cativos no Distrito Federal e Goiás, Brasil. Além disso, também objetivou-se relacionar possíveis alterações hematológicas decorrentes da presença desses agentes. Amostras de sangue de 34 animais foram analisadas por meio da PCR para detecção de presença de DNA desses agentes. O DNA de Ehrlichia canis foi detectado em 5,8% (2/34) das amostras, A. platys foi detectado 64,7% (22/34), A. phagocytophilum foi detectado em 5,8% (2/34). O DNA de Rickettsia spp. não foi detectado em nenhuma amostra. Dois felídeos apresentaram coinfecção por E. canis e A. platys e dois apresentaram coinfecção por A. platys e A. phagocytophilum. Não houve diferenças significativas nos dados hematológicos das amostras positivas e negativas. Os dados sugerem que os felídeos selvagens cativos podem servir como potenciais reservatórios para Ehrlichia spp. e Anaplasma spp., a despeito de não ocasionarem alterações hematológicas.(AU)

Vector-borne diseases have been emerging and reemerging all over the world, causing a challenge to veterinary and human medicine. Among these diseases are those caused by agents of the order Rickettsiales, obligatory intracellular Gram-negative bacteria, with ability to infect several animals and humans. Rickettsiales of the species Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. residing in cytoplasmic vacuoles of leukocytes and platelets. Rickettsiales of the species Rickettsia spp. freely infect cytoplasm or nucleus of host cells. The aim of the present study was to investigate the natural infection with Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum and Rickettsia spp. in captive wild felids at the Federal District and Goiás, Brazil. In addition, it was also aimed to relate possible changes in hemogram with the presence of these agents. Blood samples from 34 animals were analyzed by PCR to detect the presence of DNA from these agents. The DNA of Ehrlichia canis was detected in 5.8% (2/34) of samples. A. platys was detected in 64.7% (22/34), A. phagocytophilum was detected in 5.8% (2/34). The DNA of Rickettsia spp. was not detected in any sample. Two felides presented co-infection with E. canis and A. platys, and two presented co-infection with A. platys and A. phagocytophilum. There were no significant differences in hematological data from positive and negative samples. The data suggest that captive wild felids can serve as potential reservoirs for Ehrlichia spp. and Anaplasma spp., despite hematological abnormalities were not observed.(AU)

Molecular epidemiology of Anaplasma platys, Ehrlichia canis and Babesia vogeli in stray dogs in Paraná, Brazil / Epidemiologia molecular de Anaplasma platys, Ehrlichia canis e Babesia vogeli em cães não domiciliados do Paraná

Hemoparasitic infections are tick-borne diseases, which affect animals and humans. Considering the importance of canine hemoparasitic infections in veterinary clinics, this study aimed to determine the occurrence of Anaplasma platys, Ehrlichia canis and Babesia vogeli in blood samples from 182 dogs not domiciled in the city of Pato Branco, southwestern region of Paraná State, Brazil, using polymerase chain reaction (PCR). The prevalence of A. platys and B. vogeli was 32.9% and 10.9% respectively, and A. platys infection prevailed (p<0.001). The number of dogs positive for A. platys was larger in Winter (p<0.05). All blood samples were negative for E. canis. In the dogs, infestation by Amblyomma cajennense predominated over that by Rhipicephalus sanguineus (p<0.001); but there was no significant association between PCR and the variables presence of ticks, sex and age. Dogs infected by A. platys and B. vogeli showed thrombocytopenia, lymphopenia and leukocytosis; but there was no correlation between such hematological changes and infection by hemoparasites. This appears to be the first molecular study that demonstrates the existence of A. platys and B. vogeli in dogs from the southwestern region of Paraná.(AU)

As hemoparasitoses são enfermidades transmitidas por carrapatos que afetam os animais e os humanos. Considerando a importância das hemoparasitoses caninas na clínica médica veterinária, este estudo objetivou determinar a ocorrência de Anaplasma platys, Ehrlichia canis e Babesia vogeli em amostras de sangue de 182 cães não domiciliados do município de Pato Branco, região sudoeste paranaense, Brasil, utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR). A prevalência de A. platys e B. vogeli foi de 32,9% e 10.9%, respectivamente, predominando a infecção por A. platys (p<0,001). Constatou-se um maior número de cães positivos para A. platys no período do inverno (p<0.05). Todas as amostras de sangue foram negativas para E. canis. Nos cães, a infestação por Amblyomma cajennense prevaleceu sobre a infestação por Rhipicephalus sanguineus (p<0,001), mas não foi observada associação significativa entre a PCR e as variáveis presença de carrapatos, sexo e idade. Cães infectados por A. platys e B. vogeli apresentaram trombocitopenia, linfopenia e leucocitose, porém não houve correlação destas alterações hematológicas com a infecção pelos hemoparasitas. Este é o primeiro estudo molecular que demonstra a existência de A. platys e de B. vogeli em cães da região sudoeste paranaense.(AU)

Molecular detection of Anaplasma species in dogs in Colombia / Detecção molecular de espécies de Anaplasma em cães na Colômbia

Abstract Anaplasma platys and A. phagocytophilum are tick-borne pathogens that parasitize platelets and neutrophils, respectively, of humans and animals. The former is the etiological agent of canine cyclic thrombocytopenia, while the latter is that of canine granulocytic anaplasmosis. This work involved the detection and identification of Anaplasma species in blood samples from dogs in Colombia, using molecular techniques. Between December 2008 and April 2009, blood samples were drawn from the cephalic vein of 91 dogs in the central-western region of Colombia (cities of Bogota, Villavicencio and Bucaramanga) and stored in tubes containing EDTA. These samples were used in 16S rRNA-Anaplasma spp. nPCR and the preparation of blood smears. One (1.1%) of the 91 sampled dogs showed inclusions suggestive of Anaplasmataceae agents in the cytoplasm of platelets. Based on PCR followed by sequencing and phylogenetic analysis, A. platys and Anaplasma sp. closed related to A. phagocytophilum were detected in two and one dog, respectively. Interestingly, all the samples were negative for specific msp-2-A. phagocytophilum real-time qPCR, suggesting the circulation of an Anaplasma species phylogenetically related to A. phagocytophilum in dogs in the aforementioned region. Hence, Anaplasma spp. circulates among dogs in Colombia, albeit with low frequency. To the best of authors' knowledge, this is the first molecular detection of Anaplasma spp. in dogs in Colombia.

Resumo Anaplasma platys e A. phagocytophilum são patógenos transmitidos por carrapatos que parasitam plaquetas e neutrófilos, respectivamente, de humanos e animais. Enquanto o primeiro é agente etiológico da trombocitopenia cíclica canina, o último é o agente responsável pela anaplasmose granulocítica canina. O presente trabalho objetivou detectar e caracterizar, utiizando técnicas moleculares, a presença de espécies de Anaplasma em amostras de sague de cães na Colômbia. Entre Dezembro de 2008 e Abril de 2009, amostras de sangue colhidas em tubos contendo EDTA da veia cefálica de 91 cães da região centro-oeste da Colômbia (cidades de Bogotá, Villavicencio e Bucaramanga). As amostras de sangue foram utilizadas em reações de nPCR para 16S rRNA-Anaplasma spp. e confecção de esfregaços sanguíneos. Um (1,1%) dos 91 cães amostrados mostraram inclusões sugestivas de agentes Anaplasmataceae no citoplasma de plaquetas. Baseada na PCR seguida de sequenciamento e análise filogenética, A. platys and Anaplasma sp. relacionado a A. phagocytophilum foram detectados em dois e um cão, respectivamente. Interessantemente, todas as amostras mostraram-se negativas na PCR em tempo real quantitativa específica para msp-2-A. phagocytophilum, sugerindo a circulação de uma espécie de Anaplasma sp. filogeneticamente relacionado ao A. phagocytophilum em cães na região estudada. Embora em uma baixa freqüência, Anaplasma spp. circula entre cães na Colômbia. O presente trabalho representa a primeira detecção de Anaplasma spp. em cães na Colômbia.

Detección molecular de Rickettsia massiliae y Anaplasma platys en garrapatas Rhipicephalus sanguineus y caninos domésticos del municipio de Bahía Blanca (Argentina) / Molecular detection of Rickettsia massiliae and Anaplasma platys infecting Rhipicephalus sanguineus ticks and dogs, Bahía Blanca (Argentina)

Background: Rickettsioses, ehrlichioses and anaplasmoses are caused by Gram negative obligate intracellular bacteria and transmitted mainly by arthropods. Aim: To detect and perform the molecular characterization of these pathogens in ticks and domestic dogs in Bahia Blanca City (Buenos Aires, Argentina). Methods: Fifty six blood samples from dogs and 82 ticks (75 Rhipicephalus sanguineus and 7 Amblyomma tigrinum) were studied. The samples were analyzed by PCR for Rickettsia (intergenic space 23S-5S rRNA), Ehrlichia/Anaplasma (16S rRNA), and Anaplasma platys (16S rRNA). Results: 12% of R. sanguineus resulted positive for Rickettsia, identified by sequencing as Rickettsia massiliae; and 37.5% of the canine blood samples analyzed were positive for A. platys. Molecular characterization was also performed by amplification of the fragment of the citrate synthase gene (gltA) (Rickettsia genus) and the groESL gene (A. platys). Phylogenetic trees were constructed using the neighbor-joining method. These trees revealed that sequences obtained are similar to those from other geographical regions. Conclusion: The results indicate the presence of R. massiliae in R. sanguineus ticks for the second time in an urban area of South America and A. platys infection in dogs, being the southernmost region of Argentina where it has been notified.

Introducción: Las rickettsiosis, ehrlichiosis y anaplasmosis son causadas por bacterias gramnegativas, intracelulares obligadas y transmitidas principalmente por artrópodos. Objetivo: Detectar y caracterizar molecularmente estos patógenos en garrapatas y caninos domésticos del municipio de Bahía Blanca (provincia de Buenos Aires, Argentina). Material y Métodos: Se estudiaron 56 muestras sanguíneas de caninos, 75 garrapatas Rhipicephalus sanguineus y 7 Amblyomma tigrinum. Las muestras fueron analizadas por RPC para Rickettsia (espacio intergénico 23S-5S ARNr), Ehrlichia y Anaplasma (16S ARNr), y Anaplasma platys (16S ARNr). Resultados: Se detectó positividad a Rickettsia en 12% de R. sanguineus, identificándose por secuenciación a Rickettsia massiliae. Las muestras sanguíneas de los caninos resultaron en 37,5% positivas a A. platys. También se caracterizaron molecularmente por la amplificación del fragmento del gen citrato sintasa (gltA) (género Rickettsia) y del gen groESL (A. platys). Se construyeron árboles filogenéticos utilizando el método del vecino más cercano (neighbor-joining) revelando que las secuencias obtenidas son similares a las de otras regiones geográficas. Conclusión: Los resultados indican la presencia de R. massiliae en garrapatas R. sanguineus en una segunda zona urbana de Sudamérica y la infección por A. platys en caninos, siendo la región más austral de Argentina donde ha sido notificada.

Molecular and serological detection of tick-borne pathogens in dogs from an area endemic for Leishmania infantum in Mato Grosso do Sul, Brazil / Detecção sorológica e molecular de patógenos transmitidos por carrapatos em cães de uma área endêmica para Leishmania infantum do estado do Mato Grosso do Sul

Tick-borne pathogens affect a wide range of vertebrate hosts. To identify tick-borne pathogens among dogs from Campo Grande, MS, Brazil testing seropositive for Leishmania infantum (syn. L. chagasi), a serological and molecular study was conducted to detect Ehrlichia canis, Anaplasma platys and Babesia vogeli in 60 serum and spleen samples. A confirmatory diagnosis of L. infantum based on serological and molecular assays was also performed, as was sequence alignment and phylogenetic analysis to assess the identity of the parasite species infecting these animals. IgG antibodies to Ehrlichia spp., B. vogeli and L. infantum were found, respectively, in 39 (65%), 49 (81.6%) and 60 (100%) of the sampled dogs. Twenty-seven (45%), fifty-four (90%), fifty-three (88.3%), two (3.3%) and one (1.6%) dog were positive, respectively, for E. canis, Leishmania spp., Leishmania donovani complex, Babesia sp. and Anaplasma sp. in PCR assays. After sequencing, the amplicons showed 99% of identity with E. canis, B. vogeli, A. platys and Leishmania chagasi isolates. The findings of this study indicate that L. infantum-seropositive dogs from Campo Grande are exposed to multiple tick-borne pathogens, which should therefore be included in the differential diagnosis of dogs with clinical suspicion of leishmaniasis.

Patógenos transmitidos por carrapatos atingem uma variedade de hospedeiros vertebrados. Para identificar os agentes patogênicos transmitidos por carrapatos entre cães soropositivos para Leishmania infantum no município Campo Grande-MS, foi realizado um estudo sorológico e molecular para a detecção de Ehrlichia canis, Anaplasma platys e Babesia vogeli em 60 amostras de soro e baço, respectivamente. Adicionalmente, foi realizado o diagnóstico confirmatório de L. infantum por meio de técnicas sorológicas e moleculares. Também foi realizado o alinhamento e análise filogenética das sequências para indicar a identidade das espécies de parasitas que infectam esses animais. Anticorpos IgG anti-Ehrlichia spp., anti-B. vogeli e anti-L. infantum foram detectados em 39 (65%), 49 (81,6%) e 60 (100%) dos cães amostrados, respectivamente. Vinte e sete (45%), cinquenta e quatro (90%), cinquenta e três (88,3%), dois (3,3%) e um (1,6%) cães mostraram-se positivos na PCR para E. canis, Leishmania spp., Leishmania donovani complex, Babesia sp. e Anaplasma sp., respectivamente. Após o seqüenciamento, os amplicons mostraram 99% de similaridade com isolados de E. canis, B. vogeli e A. platys e Leishmania chagasi. Os resultados deste estudo indicaram que os cães soropositivos para L. infantum de Campo Grande, MS, são expostos a vários agentes transmitidos por carrapatos, e, portanto, devem ser incluídos no diagnóstico diferencial em cães com suspeita clínica de leishmaniose.

Investigação molecular de Ehrlichia spp. e Anaplasma platys em felinos domésticos: alterações clínicas, hematológicas e bioquímicas / Molecular investigation of Ehrlichia spp. and Anaplasma platys in domestic cats: clinical signs, hematological and biochemical alterations

Ehrlichia sp. e Anaplasma platys são micro-organismos Gram negativos, parasitos intracelulares obrigatórios, residindo em vacúolos citoplasmáticos de leucócitos e plaquetas, encontrados no sangue periférico ou em tecidos. Poucos relatos têm sido feitos sobre erliquiose e anaplasmose em gatos no Brasil, os quais são baseados na presença de mórulas em leucócitos e plaquetas, ou pela detecção de anticorpos. O objetivo deste trabalho foi investigar a infecção natural por Ehrlichia sp. e A.platys em gatos no Município de Campos dos Goytacazes-RJ, através da hematoscopia e pela detecção do DNA desses agentes. Foram utilizadas amostras de sangue total e de soro de 91 gatos, independente de raça, sexo e idade. Realizaram-se hemograma, bioquímica sérica e PCR, utilizando oligonucleotídes para Ehrlichia sp. e A.platys. Os dados de hematoscopia mostraram que 9,89 por cento dos gatos apresentaram mórulas em macroplaquetas. O DNA de A.platys foi detectado em 13,18 por cento dos 91 animais e em 44,44 por cento das amostras positivas à hematoscopia. O DNA de Ehrlichia sp. não foi detectado em nenhuma amostra. Nenhuma alteração foi observada nos sinais clínicos nem nos resultados laboratoriais nos animais estudados. Os dados sugerem que os felinos domésticos podem atuar como potenciais reservatórios para A. platys, como forma não sintomática das enfermidades relacionadas.

Ehrlichia sp. and Anaplasma platys are Gram-negative micro-organisms, obligate intracellular parasites, residing in cytoplasmic vacuoles of leukocytes and platelets, found in peripheral blood or tissue. Few reports have been made about ehrlichiosis and anaplasmosis in cats in Brazil, which are based on the presence of morulae in leukocytes and platelets, or by detecting antibodies. The objective of this study was to investigate the natural infection with Ehrlichia sp. and A. platys in cats in Campos dos Goytacazes-RJ, by hematoscopia and DNA detection of these agents. Samples of whole blood and serum from 91 cats, regardless of race, gender and age. Blood count, serum biochemistry and PCR using primers for Ehrlichia sp. and A. platys were perfomed. Data from hematoscopia showed 9.89 percent of morulae only in platelets. The DNA of A. platys was detected in 13.18 percent of the 91 samples and 44.44 percent of the positive at hematoscopia. The DNA of Ehrlichia sp. was not detected in any sample. All animals studied did not show clinical signs neither positive laboratory results. The data suggest that domestic cats can serve as potential reservoirs for A. platys as asymptomatic form of related diseases.

Molecular detection of anaplasma platys in a naturally-infected cat in Brazil

Following the accidental finding of inclusion bodies similar to Anaplasma platys in a stained blood smear from a cat, DNA analysis of the 16S rRNA gene was performed and 100 percent identity was found with different strains of A. platys. These data confirm that cats are susceptible to parasitism by A. platys.

Molecular diagnosis of Anaplasmataceae organisms in dogs with clinical and microscopical signs of ehrlichiosis / Diagnóstico molecular de agentes da família Anaplasmataceae em cães com sinais clínicos e microscópios de erliquiose

Ehrlichioses are important emerging zoonotic tick-borne diseases that can affect both animals and humans. Clinical manifestations of ehrlichiosis caused by different members of Anaplasmataceae in dogs are similar to each other and to other diseases showing systemic manifestation. The observation of inclusions in white blood cells and in platelets cannot be used to confirm the Anaplasmataceae etiologic agent of the disease. In this work we assessed the presence of Anaplasmataceae agents in 51 dogs from two different cities (Jaboticabal and Campo Grande) showing clinical and microscopical diagnosis of ehrlichiosis, by using molecular techniques. Anaplasmataceae DNA were amplified in 46/51 (90.2 percent) of the blood samples; 22 (40 percent) samples from Jaboticabal and 10 (18.2 percent) from Campo Grande were positive for E. canis nPCR. Anaplasma platys DNA was amplified in 2 samples from Jaboticabal and in 11 from Campo Grande. Phylogenetic analysis of E. canis and A. platys DNA confirmed the infection agent and showed that PCR is the most reliable method to diagnose ehrlichial infection.

Erliquioses são importantes enfermidades emergentes transmitidas por carrapatos que podem afetar os animais e o homem. Em cães, as manifestações clínicas da erliquiose causada por diferentes membros da Família Anaplasmataceae são similares entre si e entre outras enfermidades de manifestação sistêmica. A observação de inclusões em leucócitos e plaquetas não pode ser utilizada para diagnosticar o agente etiológico pertencente à Família Anaplasmataceae. O presente trabalho objetivou detectar, por meio de técnicas moleculares, a presença de agentes da Família Anaplasmataceae em 51 cães de duas diferentes cidades (Jaboticabal, SP e Campo Grande, MS) apresentando sinais clínicos e microscópios sugestivos de erliquiose. DNA de agentes da Família Anaplasmataceae foi amplificado em 46/51 (90,2 por cento) das amostras de sangue; 22 (40 por cento) amostras de Jaboticabal e 10 (18,2 por cento) amostras de Campo Grande foram positivas na nested PCR para E. canis. DNA de Anaplasma platys foi amplificado em duas amostras de Jaboticabal e em 11 de Campo Grande. Análise filogenética dos DNAs de E. canis e A. platys das amostras confirmou o agente etiológico e mostrou que a PCR é o método mais confiável no diagnóstico das infecções por agentes da Família Anaplasmataceae.